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大肠杆菌测定仪:大肠杆菌检测新技术

发布日期: 2021-01-30
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大肠杆菌测定仪:大肠杆菌检测新技术。随着人们生活水平的提高,食品安全越来越受到重视。在不断报道的食品安全事件中,大肠杆菌是引发这些事件的主要影响因素之一,也是判断食品污染程度的重要参数。因此,使用快速、可靠、简单的方法准确检测食品中大肠杆菌的数量是否超标非常重要。

大肠杆菌检测新技术

气相色谱和高效液相色谱

气相色谱主要是对大肠杆菌进行一系列衍生化预处理后,为后面的分析研究提供尽可能多的化学成分。大肠杆菌的污染程度可以通过顶空气相色谱法来分析,其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2来分析微生物。该方法对食品质量安全检测具有重要意义。与上述传统技术相比,该方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。高效液相色谱(HPLC)主要根据离子对反相色谱的原理分析核酸。高效液相色谱法主要针对DN片段的分离。长链DN携带更多的磷酸基团,因此更多的TE会与之融合,其在柱中的停留时间会增加。因为乙腈是亲水性的,DN可以被它分离,在一定的变性温度下,光谱可以显示出明显的吸收峰。该技术具有精度高、灵敏度高、成本低的优点,可以大大提高工作效率。

三磷酸腺苷生物发光技术

三磷酸腺苷生物发光技术是近年来发展迅速的一种微生物快速检测方法。TP是活细胞中常见的能量代谢产物,为细胞提供各种生理活动所需的能量,其在生物体内的含量维持在一定范围内。检测TP含量的一种方法是荧光分光光度法,生物发光是荧光素酶催化活细胞的荧光。目前荧光素酶主要来自北美的萤火虫,相对分子量为6.2万。它能催化荧光素的氧化反应。该反应的终产物不稳定,并迅速分解产生荧光。与传统的检测方法相比,不同之处在于检测结果可以在几分钟内获得,荧光光度计便携、使用方便,适合现场检测。这项技术可用于检测微小污染物的水平以及食品加工设备及其表面的清洁度。

聚合酶链反应检测技术

PCR(聚合酶链式反应)早由Kleppe等人于1971年提出,并于1985年被确认为一种检测方法。PCR检测技术是一种聚合酶链式反应,采用变性-退火-延伸三个步骤,使DN基因在体外实现解链和解链,类似于体外增加和复制的一种形式。理论上,一个DN分子在2小时内可以扩增到106 ~ 109倍,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物的荧光带。

目前,聚合酶链反应技术广泛应用于生命科学的许多学科。在食品微生物检测领域,聚合酶链反应可以快速检测食品中的微生物含量。常用的有免疫聚合酶链反应、实时荧光定量聚合酶链反应、多重聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应和实时定量聚合酶链反应。史云等人建立了一种检测肉类和肉制品中大肠杆菌的双重聚合酶链反应方法,但该方法需要较长的样品纯化时间,对操作人员的专业知识要求较高。

生物传感器检测技术

生物传感器是基于生物化学传感技术,以抗体、酶、细胞等为识别元件,结合信号转换器和电子测量仪器的分析工具。目前成熟的商用传感器包括免疫传感器、酶传感器、DN杂交传感器、微生物传感器、分子印迹传感器等。生物传感器具有灵敏度高、选择性高、稳定性好、成本低等优点,可以在复杂系统中快速在线监测。目前,用于信号传输的方法包括声表面波传输、电化学方法和光传输方法。免疫传感器和基因传感器主要用于食品微生物检测。原理是利用DN杂交和抗原抗体反应进行检测,然后转换成光信号或电信号,由仪器放大输出。生物传感器分子识别元件的载体可以由各种材料制成,大多数是光纤和荧光光度计。殷涌光等人利用抗体免疫吸附反应,利用一级抗体——抗原和二级抗体的夹心法,大大增加了胶体金复合抗体作为二级抗体的质量,延长了胶体金复合抗体与微生物的结合过程,放大并稳定了信号,从而显著提高了检测的准确性。

免疫磁珠技术

免疫磁珠技术是一种大肠杆菌的分离技术。原理是利用磁珠作为抗体载体,将磁珠与大肠杆菌结合,通过磁力实现机械运动来分离大肠杆菌。与其他细菌分离方法相比,免疫磁珠技术大大提高了样品中致病性副溶血弧菌的检测效率。免疫磁珠技术可以快速处理不同菌株样品中的不同微生物,这种方法可以大大提高检测效率。

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